本发明属于基因工程领域,公开了一种高保真DNA聚合酶、编码该高保真DNA聚合酶的基因,以及该高保真DNA聚合酶的制备方法,及其在核酸扩增中的应用。本发明公开的高保真DNA聚合酶,其具有SEQ ID NO1所示的氨基酸序列,或者SEQ ID NO1所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的氨基酸序列。该高保真DNA聚合酶能够扩增高GC含量的核酸模板、样品纯度较低的核酸模板,同时,也能实现对极低的模板量的扩增,大幅提高了高保真DNA聚合酶的灵敏度和扩增效率,同时具有较高的保真性,适合各类PCR及对扩增保真性要求较高的实验,也适合作为PCR扩增试剂盒中的高保真DNA聚合酶。